CRISPR 기반 돌연변이 클로닝을 위한 GUIDE-seq 및 CIRCLE-seq 비교 분석법

GUIDE-seq와 CIRCLE-seq는 각각 CRISPR/Cas9 시스템을 이용하여 게놈 내 비표적(off-target) 절단 부위를 체계적으로 식별하는 첨단 실험 기법이다.

방법론적 접근

• GUIDE-seq: Cas9의 sgRNA 가이드 서열을 사용하여 게놈 전반의 절단 사건을 직접 포착하며, 주로 절단 위치의 정확도를 확인하는 데 중점을 둔다.
• CIRCLE-seq: DNA를 원형화하여 절단 지점을 증폭시키는 방식으로, 보다 광범위하고 높은 민감도로 잠재적 돌연변이 부위를 스크리닝한다. 이는 off-target 효과 분석에 강점을 보인다.

두 방법 모두 CRISPR 유전자 편집의 정확성을 검증하고, 예상치 못한 게놈 불안정성을 평가하는 데 필수적으로 사용되며, 결과 분석에는 생물정보학 기반의 정량적 비교가 중요하다.